Probenvorbereitung SAXS
Wir bieten für die akademische Nutzung für Angehörige der HHU sowie externe Nutzer ein breit gefächertes Spektrum an wissenschaftlicher Unterstützung und Dienstleistungen an.
Für die SAXS-Experimente müssen die zu bearbeitenden Proteine bestimmte Mindestanforderungen erfüllen, über die wir Sie auf dieser Seite informieren möchten.
Für die akademische Nutzung bieten wir für Angehörige der HHU sowie für externe Nutzer die Möglichkeit, SAXS Messungen durchzuführen. Das CSS ist ausgestattet mit einem Xeuss 2 in-house SAXS-Gerät der Firma Xenocs. Der Detektorabstand kann zwischen 260 mm bis 2500 mm variiert werden. Es steht eine Cu-Quelle mit einer Wellenlänge von 1.5 Å zu Verfügung. Die Probenkammer kann sowohl unter atmosphärischem Druck als auch unter Vakuum genutzt werden. Für die Messungen stehen Kapillaren sowie Knopfzellen zur Verfügung. Ebenso besteht für biologische Proben die Möglichkeit, diese in einer temperierbaren Flusszelle zu messen und/oder automatisiert mittels eines temperierbaren Probenwechslers zu injizieren.
Für eine bevorstehe Messung müssen einige Faktoren beachtet werden bzw. Unterlagen/Reagenzien beigefügt werden (siehe auch Auftragsformular):
- Der niedrigmolare Proteinpuffer sollte so wenig Agenzien wie möglich enthalten (gerade so viel, dass das Protein stabil ist; kein Phosphatpuffer und maximal 5 % Glycerin)
- Das Protein muss sauber (min. zu 95 % in der SDS-PAGE) und homogen sein (nur ein oligomerer Zustand)
- Das Protein muss über mind. 2 Tage stabil sein (bei 4 °C, 12 °C oder 20 °C)
- Mindestkonzentration an Protein: 5 - 10 mg/ml
- Mindestvolumen an Proteinlösung pro Messung: 70 µl
- Bitte etwa 2 ml Proteinpuffer mit Angaben über die Zusammensetzung beifügen. (Wichtig: Es muss exakt derselbe Puffer sein, in dem das Protein gereinigt/dialysiert/konzentriert wurde, um genaue Intensitätswerte zu erhalten!)
Darüber hinaus sind einige weitere Angaben für unsere Experimente notwendig:
- Datum der Proteinreinigung und Lagerbedingungen (Temperatur)
- Abbildung SDS-PAGE
- Homogenitätsnachweis (z. B. Abbildung Gelfiltration)
- Proteinkonzentration, Molekulargewicht, Extinktionskoeffizient und Pufferzusammensetzung
- Sofern bestimmte Zusätze (z. B. Metall-Ionen, Cofaktoren etc.) für die Aktivität oder Stabilität essentiell sind, bitte angeben
- Proteinsequenz inkl. Tags und Schnittstellen (Textfile)
- Sofern vorhanden: Struktur oder Homologiemodel
Zur Klärung noch offener Fragen oder zur Terminabsprache kontaktieren Sie uns bitte.
Für die Durchführung der Experimente benötigen wir ausserdem einige Angaben zum Protein und ggf. Reagenzien, weshalb wir für jedes Projekt ein ausgefülltes Auftragformular und die darauf genannten Unterlagen benötigen.